熒光原理
熒光技術(shù)普遍的被應(yīng)用在研究分子等級(jí)的結(jié)構(gòu)與動(dòng)態(tài)行為上,如高分子、固態(tài)表
面、生物細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)、DNA、活體細(xì)胞等領(lǐng)域;經(jīng)過設(shè)計(jì)過的熒光 probe(探
針),藉由對(duì)周圍環(huán)境的高敏感度,可即時(shí)的解析被研究系統(tǒng)的極化、流動(dòng)性、
有序性、電位高低等相關(guān)訊息。此外熒光還有自我淬息(self-quenching)與非均向
性(anisotropy)兩項(xiàng)通性,可利用在研究分子間的空間排列與鍵結(jié)情形。
一般而言,熒光分子(or fluorescence probe)可以分成三類: intrinsic probe、extrinsic
covalently bound probe、extrinsic probe。Intrinsic probe 是指待測物本身就帶有熒
光的基團(tuán),待測物中本身有熒光的例子相當(dāng)特殊且少見,只有少數(shù)特殊的應(yīng)用,
如蛋白質(zhì)上的熒光胺基酸 tryptophan。Extrinsic covalently bound probe 是將熒光
基團(tuán)以共價(jià)鍵的形式鍵結(jié)在 probe 上,這類的 probe 最大的好處在于知道熒光基
團(tuán)位于分子的位置,廣泛應(yīng)用在高分子長鏈、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等領(lǐng)域,我們實(shí)驗(yàn)用
的 NBD-PC 也是屬于此類。Extrinsic probe 則是屬于待測物以外外加的 probe,
extrinsic probe 的使用主要是考慮到 extrinsic covalently bound probe 合成的困難,
這樣的 probe 通常擁有官能基與待測物去交互作用,被廣泛運(yùn)用在測定親水性與pH 值上