以紫外線取得酵母菌突變種

材    料：

YPD medium及plates

選擇mutants的plates(自行設(shè)計)

或以溫度選擇temperature sensitive metants

UV燈(使用UV燈時應(yīng)戴安全眼鏡)

方    法：

1.     將一種yeast長在5ml YPD medium中過夜, 30℃振盪300rpm.

2.     取1.5ml yeast液, 以微量離心機, 最高速離心5sec, 倒去上清, 再以dH2O(消毒過)洗2次. 之后將細(xì)胞溶于1ml dH2O中.

3.     測OD600, 若介于2.5~3.0, 則細(xì)胞述大約為8×107cells/ml, 將細(xì)胞逐次稀釋置2,000cells/ml, 再以0.1ml涂皿.

4.     將涂有Yeasts的皿(保留2個為對照組), 置UV燈下, 照使達(dá)300eg/mm2, 再放室溫, 長3天. 對照組為測其生存之用.

5.     取消毒過的圓形濾紙,  做replica-plate, 將一個皿放室溫, 一個放37℃, 長3天. 凡在室溫有長而37℃不長的可能就是temperature sensitive colonies, 此一步驟或以抗藥性來選出抗藥性突變種亦同.