由電泳膠中提取DNA

本實驗採用GENECLEAN III Kit,此套實習(xí)材, 保存于室溫, 約有80﹪的DNA回收率.

材    料：

NaI液

New Wash濃縮液

TBE modifier

GCIII Elution Solution

其中NaI為6M sodium iodide solution

TBE modifier是用于泳膠, 若是以TBE與Agarose製成, 則加切下泳膠體積1/2之TBE modifier及4.5倍體積的NaI.

EZ-GLASSMILK是溶于dH2O的浮懸液, 沉淀下來, 應(yīng)沉淀與水各半, 若水分蒸散, 可加入適當(dāng)dH2O.

New Wash solution之配置：用14ml之濃縮液, 加280ml dH2O, 在與310ml 100﹪ethanol(或95﹪ethanol)溷合. 用此套實習(xí)材將DNA游泳膠中提出后, 不含ethidium bromide.

因為TBE對DNA粘附在EZ-GLASSMILK上有影響, 故在將泳膠加入NaI融化前先加入TBE modifier以去除此影響(降低pH).

方    法：

1.     以小刀片將含DNA的泳膠切出(在紫外線平臺上執(zhí)行), 秤重量, 以重量估算體積, 大約1g為1ml, 將此小塊泳膠放入1.5ml離心管中(切塊最好在0.4g以下).

2.     若電泳是在TAE中執(zhí)行者, 則不用加TBE modifier, 直接加入3倍體機(jī)的NaI液, 若電泳在TBE中執(zhí)行者, 則先加入1/2倍體積之NaI液. 將離心管置55℃水浴器中, 每隔一分鐘取出溷合一下, 再放入, 約5分鐘泳膠可完全融化.

[此套實習(xí)材也可用在為提純DNA,
即將DNA液中直接加入3倍體積的NaI液, 然后進(jìn)行下列步驟].

1.     加入適量之EZ-GLASSMILK, 加入之量以預(yù)估DNA含量有關(guān), 即每1μg DNA要加2μl, 但最初至少要加5μl, 亦即若DNA含量少5μg, 亦至少要加5μl；若多于5μg, 再每多1μg, 加2μl.

2.     充分溷合, 并置室溫5min, 每1分鐘溷合一下.

3.     離心2,500rpm, 10sec.

4.     吸除上清液, 加入400μl之New Wsah液, 充分溷合, 再離心2,500rpm, 10sec, 吸除上清, 如此再重複2次(共洗3次), 吸除上清.

5.     加入20μl之GCIII Elution Solution, 充分溷合, 離心3,000rpm, 30sec, 吸取上清, 即為所要之DNA.