限制酶切割DNA技術(shù)

材    料：

dH2O

10X restriction endonuclease buffer (採購限制酶時同時向廠商索取)

Gel loading buffer (通常亦隨限制酶同時附贈)

方    法：

1.     將下列材料以micropipettor吸取放入一個1.5ml的離心管中：

Xul DNA (DNA的量應(yīng)再0.1~0.4μg之間, 溶于dH2O或TE中)

2μl 10X restriction buffer

18-Xμl dH2O

2.     加入restriction endonuclease(每μg DNA 1~5 unit, 每unit 表示限制酶再1hr中可完全切割1μ DNA的限制酶量), 至37℃, 1hr.

3.     加入5μl gel loading buffer.

4.     依DNA電泳程序以電泳檢測結(jié)果.

    若是DNA要以一個以上的酶切割, 可視各酶條件, 若條件相若, 可同時加入；若條件不同如溫度, 鹽分等要求. 可分別切割, 先切割溫度要求低的, 鹽分要求低的, 再加入鹽分(如1μl的1M NaCl), 或提高溫度.

    若是用同一個酶同時切割許多DNA標(biāo)本, 可先將10X restriction endonuclease buffer, dH2O, restriction engonuclease置在另一個離心管中依總需要量溷合好, 再分別吸入不同DNA標(biāo)本管中, 待切割時間到, 再加入gel loading buffer, 再進(jìn)行電泳.