解決顯微鏡拍照時細(xì)胞質(zhì)內(nèi)熒光和細(xì)胞核內(nèi)熒光不在同一焦平面的現(xiàn)象？

您好我想問下怎么樣解決熒光顯微鏡拍照的時候調(diào)胞質(zhì)內(nèi)熒光細(xì)胞核內(nèi)熒光不能同時調(diào)清晰的來拍照的問題？
我拿構(gòu)建好含基因序列的pEGFP-N3進(jìn)行載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞，然后熒光顯微鏡來觀察基因表達(dá)的亞細(xì)胞定位，然后使用Hoechst染核。
但是發(fā)現(xiàn)觀察時細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)部分時同時都會有綠色熒光信號，胞質(zhì)內(nèi)信號占多半，還有就是拍照的時候，如果調(diào)胞質(zhì)內(nèi)熒光清楚了那么胞核內(nèi)熒光就會變得模糊，如果把胞核內(nèi)熒光調(diào)清晰了 ，胞質(zhì)內(nèi)熒光就會模糊。
怎樣解決這個問題呢？

上海光學(xué)儀器廠：

我們在用顯微鏡的高倍率的物鏡的時候，因為景深較淺的原因，就會出現(xiàn)不同部位不在同一焦平面的現(xiàn)象。
可采取兩種方法解決：
1：對不同熒光通道分別進(jìn)行調(diào)焦、拍攝，然后將各通道圖片進(jìn)行疊加。
2：對細(xì)胞進(jìn)行Z軸拍攝，也就是說對細(xì)胞的不同焦平面進(jìn)行多次拍攝，然后對這些照片進(jìn)行景深擴(kuò)展處理。（Z軸投影）