活細(xì)胞成像中實(shí)驗(yàn)視頻圖像
顯微鏡制造廠商
在活細(xì)胞成像中還需要考慮使用幾種FP的一引起折中方
案。例如,隨著顏色種類增加,數(shù)據(jù)收集的速度會下降,這
是困為每種顏色需要不同的數(shù)據(jù)收集條件。另外,隨著顏色
的增加,熒光間的交叉干擾變得更加復(fù)雜,這是因?yàn)镕P的發(fā)
射光譜一般很廣,最后,由于不同F(xiàn)P間相對熒光強(qiáng)度不同,
每種顏色需要不同的信號整合時間,CFP 和BFP 的熒光較為
黯淡,因此可能需要更長的信號收集時間,而同樣時間對于
熒光較強(qiáng)的GFP 和YFP 就可能過飽和了,
因此,F(xiàn)P實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)需求平衡就顯得很重要(如加速收
集還是最佳分離)。例如,對于需快速收集的實(shí)驗(yàn)來說,使
用EY-FP 與mKO 組合就是一個不錯的選擇,因?yàn)檫@兩個FP可
以共用一個激發(fā)設(shè)置;而使用組合可以提供較好的光譜分離,
還有一個辦法就是使用組合,然后用代聚焦顯微鏡的543nm
激光激發(fā),這樣就可以同時有單波長激發(fā)和極好的光譜分離。