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熒光彩色成像需考慮濾光片的交叉-生物熒光分析

信息分類：生命科學(xué)資訊　　　　作者:YIYI發(fā)布　

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熒光彩色成像需考慮濾光片的交叉-生物熒光分析

    應(yīng)用濾光片組進(jìn)行熒光多色成像需要重點考慮濾光片的交叉干擾(cross talk,通
常也稱為crossover或bleed through),濾光片干擾意味著一個FP的熒光信號溢出到另
一個信號通道中。這種干擾既可發(fā)生于FP的激發(fā)也可發(fā)生于發(fā)射。兩個或更多熒光團(tuán)
之間的激發(fā)干擾作用于光譜的藍(lán)光部分，而發(fā)射干擾作用于光譜的紅光部分。例如.
GFP通常可以通過紅光發(fā)射濾光片檢側(cè)到，而紅色熒光蛋自通常不能通過綠色濾光片
檢測到。山于這種原因.多色成像時首先使用不產(chǎn)生短波于擾的激發(fā)光對遠(yuǎn)紅外熒光
蛋白進(jìn)行成像。例如，用共聚焦顯微鏡多線氫激光對EYFP和EGFP在同一細(xì)胞中成
像時.EYFP首先用超過EGFP吸收位的514nm激發(fā)，然后用530-550nm波段濾光
片收集發(fā)射光。發(fā)射濾光片不是很關(guān)鍵，因為在這里只有EYFP被激發(fā)。第二次掃描
用于成像EGFP。這里使用458nm或477nm認(rèn)激光線激發(fā)，然后用非常窄的490
500nm發(fā)射濾光片成像。這種濾光片可以精確地排除EYFP熒光而只抓取EGFP的特
定光學(xué)信號。繭然488nm復(fù)激光接近EGFP的最大激發(fā)值，但是它非常接近發(fā)射濾光
片通帶，因此所收集的影像有激光干擾。
本文由出自上海光學(xué)儀器廠，轉(zhuǎn)載請注明
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