顯微鏡百科 -鼠前列腺增生模型制備

鼠前列腺增生模型制備
信息分類:新聞中心 日期: 2011-8-1 10:08:58
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鼠前列腺增生模型制備
方法:孕16~18 d的近交系BALB/C小鼠經(jīng)脫頸離斷處死,取出胚胎,在含在青霉素和鏈霉素的0℃~4℃ Dehank液中,體視顯微鏡,用于準(zhǔn)確地取材。
于立體顯微鏡下微解剖,修剪掉胚胎膀胱,Wolffian和Mullerian管,剩下完整的尿生殖竇(Urogenital sinus,UGS)。將UGS置入1%的胰蛋白酶溶液中,4℃,消化120 min,以去掉上皮成分保留UGM。用含50%的小牛血清培養(yǎng)液清洗,終止胰蛋白酶的消化作用。制備好的UGM保存于Dehank培養(yǎng)液中,3 h內(nèi)使用。整個操作過程均在無菌條件下進(jìn)行[1]。
為驗證制備的UGM符合本實驗要求,將UGM作如下研究:①解剖顯微鏡下,觀察UGM是否殘留有Wolffian和Mullerian管等附屬結(jié)構(gòu);②UGM連續(xù)切片,HE染色觀察是否殘存上皮成分;③為進(jìn)一步證明消化后的UGM無上皮成分并具有活性,將UGM種植于同系雄鼠腎包膜下,四周后切取移植物,作連續(xù)切片,HE染色觀察。
1.2 動物接種
成年雄性近交系BALB/C小鼠30只,隨機(jī)分為:正常對照組,假手術(shù)組,UGM種殖組,每組10只。乙醚吸入麻醉,妥善將鼠固定于操作臺。腹正中切開,暴露膀胱及腹側(cè)前列腺,將制備好的UGM種植于腹側(cè)前列腺內(nèi)。假手術(shù)組除不種植UGM外,余步驟同上。
1.3 觀察方法
接種后,普通喂養(yǎng),30 d處死動物,取出腹側(cè)前列腺,稱其濕重,計算出各組前列腺濕重的平均值。前列腺標(biāo)本用10%甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理
各組前列腺濕重以±s表示,均數(shù)間比較采用t檢驗。
2 結(jié)果
2.1 制備的UGM
制備的UGM在解剖顯微鏡及下HE染色觀察,無殘存附屬結(jié)構(gòu),無上皮細(xì)胞存在,見圖1。UGM在腎包膜下長生四周后,切取并作HE染色觀察,細(xì)胞形態(tài)與接種前一致,無腺樣結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步說明無上皮成分,并具有活性,符合本實驗要求。

