了解多肽鏈折疊方式的另一種研究方法
變性研究往往用來了解三維結(jié)構(gòu),大多數(shù)變性的方法和解釋都
是復(fù)雜的,但是下面的例子說明所能獲得的幾種信息。
蛋白質(zhì)的復(fù)性
復(fù)性
是了解多肽鏈折疊方式的另一種研究方法,因為單個氨基酸的
置換常會改變蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu),自然會產(chǎn)生這樣的觀點,蛋白
質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)應(yīng)該完全由它的氨基酸順序決定,這意味著由側(cè)鏈
相互作用所支配的多肽鏈應(yīng)該自發(fā)反復(fù)折疊直至達到具有最小自
由能的構(gòu)象,此外,應(yīng)在適當部位形成三硫鍵,根據(jù)這個觀點,
可預(yù)期在適當條件下變性蛋白質(zhì)會重新折疊形成天然分子,事實
上用核糖核酸酶已經(jīng)得到這樣的結(jié)果,這個蛋白質(zhì)是含124個氨
基酸的單鏈,其中八個是半胱氨酸,形成四個二硫鍵,如果用變
性劑如尿素處理,然后除去尿素,立即發(fā)生復(fù)性,因為二硫鍵提
供了使鍵作適當折疊的參照點,如果還加入頸基乙醇,二硫鍵就
斷裂,變成無規(guī)則線團,如果緩慢除去尿素和巰基乙醇,能完好
地出現(xiàn)復(fù)性,因為從八個半胱氨酸有105種形成二硫鍵的可能方
式,對這個現(xiàn)象的解釋是這個蛋白質(zhì)的折疊完全是由氨基酸順序
決定的,因為在折疊過程中半胱氨酸片于可以配對的正確位置,
故形成了合適的二硫鍵,二硫鍵的形成并不指引折疊,這方面的
證據(jù)來自下述實驗,先除去巰基乙醇,并在除去尿素前進行氧化
,也就是說,在是無規(guī)線團時進行氧化,用這個方法不能形成天
然分子。