光學顯微鏡要求試樣被切成片將決定成像的質(zhì)量
全息原理是加伯試圖提高電子顯微鏡的分辨率而于1948年
提出的.他指出應用干涉原理我們的確能夠同時記錄光波的振輻
和位相.在這種方法中,相干的參考光波加到從物體發(fā)出的光波
上并且記錄由此產(chǎn)生的干涉圖樣.干涉圖樣表征著物體,因而稱
為全息圖(全息圖意味著全部記錄,即記錄振幅與位相).雖然當
我們觀察一張全息圖時它并不象物體,但是當被記錄的圖樣用適
當選擇的再現(xiàn)光照明時,那時從全息圖上發(fā)出來許多成分光波,
其中一個光波在振幅與位相結(jié)構(gòu)方面與物體完全相似.因此,當
觀察這束光波時,效果如同物波仍在原位置一樣,雖然物體可能
不在那里.在再現(xiàn)的時候,物波本身是從全息圖發(fā)出的,因此當觀察
這個光波時我們得到整個三維效果.我們可以改變位置和.‘向后觀察”
存在的各物體并.且可以向不同距離處聚焦,因此可感到象的深度.
如上所述,大多數(shù)顯微技術(shù)工作的對象都是死的,是經(jīng)過化學處理固定的
或
冷凍的組織。如光學顯微鏡要求試樣被切成薄片,稱為組織切片,其厚度在I-
IOOO微米。切片在可見光中是透明的,并可以用不同的顏料著色以增強不同組
分
的對比性。實際上,制備試樣中的每一個步驟都將影響最后結(jié)果的質(zhì)量。顯微
技
術(shù)中組織切片的制備叮分為如下步驟:固定、清洗、脫水,用過渡溶劑進行滲
透,用包埋介質(zhì)(石蠟、蜂蠟或樹脂等)進行滲透、包埋、切片。該過程從活的
生物組織開始,到組織變成無水而固定的狀態(tài)存在于人造介質(zhì)中為止。人造介
質(zhì)
滲人組織并取代了組織中的水,這樣使得組織有足夠的硬度而有利于切割成片
。