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植物細(xì)胞內(nèi)生細(xì)菌研究用熒光顯微鏡

信息分類(lèi)：生命科學(xué)資訊　　　　作者:YIYI發(fā)布　

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植物細(xì)胞內(nèi)生細(xì)菌研究用熒光顯微鏡

    熒光標(biāo)記與報(bào)道基因技術(shù)的結(jié)合使用被證明是植物上細(xì)菌行為的一種有力的研究工
具。熒光報(bào)道基因和目的細(xì)菌基因的融合使得我們能夠在.顯微鏡下在單細(xì)胞個(gè)體水平_L
測(cè)定細(xì)菌墓因的轉(zhuǎn)錄活性，而不是在群體水平上。因此，在特定環(huán)境下我們就能夠測(cè)定
基因的轉(zhuǎn)錄活性的分布，由此可進(jìn)一步了解篆因潛在表型所發(fā)揮的作用。

    除非實(shí)驗(yàn)研究是在無(wú)菌條件下開(kāi)展，否則還需要一個(gè)額外的標(biāo)記基因來(lái)將研究細(xì)菌
對(duì)象與植物本身的內(nèi)生細(xì)菌區(qū)分開(kāi)來(lái)。額外標(biāo)記的使川將確保由于所包含的目的基因轉(zhuǎn)
錄活性低甚至沒(méi)有從而導(dǎo)致報(bào)道基因信號(hào)很低的細(xì)菌能夠被檢測(cè)出來(lái)。在首次該類(lèi)研究
中，Brandl等人將腳基因與E. herbicola的生長(zhǎng)素(IAA)合成基因融合在一起，用熒
光原位雜交(FISH)技術(shù)研究IAA合成在這種豆葉細(xì)菌E. herbicola種類(lèi)中的分布

將含有GFP融合基因的轉(zhuǎn)化￡. herbicola菌株接種在植物上，培養(yǎng)以使細(xì)菌
生長(zhǎng)定植。然后，從葉片表面將細(xì)菌細(xì)胞漂洗下來(lái)，在顯微鏡玻片上用對(duì)E. herbicola特
異性的is甲基羅丹明標(biāo)記的16S rRNA探針進(jìn)行熒光原位雜交。對(duì)獲得的熒光顯微圖像
進(jìn)行數(shù)字分析來(lái)測(cè)定經(jīng)FISH染成紅色的細(xì)菌細(xì)胞所發(fā)出的綠色熒光強(qiáng)度。

本文由出自上海光學(xué)儀器廠，轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明
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