用倒置相差顯微鏡的用途-計數器放于顯微鏡載物臺上
信息分類：生命科學資訊 作者:YIYI發(fā)布
用倒置相差顯微鏡的用途-計數器放于顯微鏡載物臺上
操作步驟
a.準備計數器。輕輕地濕潤中央網格區(qū)域的各個邊，用兩個拇指的壓力使蓋玻片水平
地從邊緣滑動。當在中央標記區(qū)臨近的任何一邊均能肴見牛頓環(huán)(彩虹色)時，蓋玻片位義
正確(注1:當蓋玻片位置正確時，改良的Neubauer計數器的厚度是1mm;依據0.1mm x
lrnmX lmm體積決定細胞數的計算。如果蓋玻片位置不正確，細胞數汁算會有錯誤。
b. 1000r/min離心細胞懸液5min.棄上清。將細胞重懸于已知體積的培養(yǎng)基中。
c.用巴斯德吸管來回吹打細胞懸液幾次，混勻.確定細胞均勻分散。
d.用微量加樣器吸取2505L混勻的細胞懸液，轉人袖珍管。用一個干凈的加樣器尖吸
取等體積臺盼藍溶液加入細胞懸液中。用拇指和食指快速輕彈袖珍管幾次使之混勻。立即用
一個巴斯德吸管尖吸取一滴細胞懸液，輕輕地將其滴在臨近計數區(qū)的蓋玻片邊緣上，毛細作
用使細胞懸液移到蓋玻片下面。填滿中央和邊緣溝之間的區(qū)域。在蓋玻片的另一邊重復該操
作(注:如果蓋玻片沒有正確放咒，計數器和計數器任何一邊的小溝里將溢滿細胞懸液，無
法獲得準確的細胞計數)。
e.將計數器放于顯微鏡載物臺上，移動載物臺直到將三條平行線界定的25個小方格的
網格位于中央為止。計25個小方格內的總細胞數(染色和未染色的)(它們每一個又再分為
16個更小的方格便于計數)。為了避免將同一個細胞重復計數.只數三線隔開的壓上線、左
手線和中央區(qū)的細胞。如果細胞數大可用一個計數器(注1:計數面積取決于細胞密度。如
果中央的方格細胞數達到100.這個對于精確度而言足夠了。如果細胞密度較低，計數四個
角的總細胞數，并取平均值。為了更精確建議重復細胞計數，并取兩次讀數平均伉。注2:
如果用倒置相差顯微鏡，不染色即可區(qū)分活細胞和死細胞�；罴毎髁量烧凵涑銮宄妮�
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