DNA顯微圖像數(shù)據(jù)分析用檢測
光學顯微鏡
顯微圖像分析的樣品制備
DNA含量和形態(tài)學的
測量是圖像分析的兩個主要內容。檢測目的不同,所采用的
方法和條件也有差別。
1. DNA圖像分析的樣本制備臨床上細胞學標本主要來源于穿刺針抽吸涂片及手
術后新鮮腫瘤的組織印片。以測量DNA為目的的樣本細胞,多經(jīng)空氣干燥后,再經(jīng)中
性緩沖、福爾馬林固定;對陳舊的細胞學姬姆薩染色涂片,可采用二甲苯浸泡,脫去蓋
片,以甲醉退去原有染色;對存檔石蠟包埋的組織,可取常規(guī)方式切片觀察,也可利用
脫石蠟細胞核分散技術,獲得所需測量的標本。
2. DNA顯微圖像術染色方法細胞內DNA染色方法有多種,在圖像分析中最常
用的是Feu lgen-DNA染色法。其基本步驟包括DNA的酸解、雪夫液染色及硫化。DNA
酸解的目的是去除嗦吟集團,暴露脫氧核樸中的醛基,醛基與染液結合顯色。這一過程
要求嚴格控制酸解條件,可選用5N鹽酸,室溫1小時或1N鹽酸、60℃ 8分鐘處理。
染色過程應在室溫、避光條件下進行,時間約為2小時,硫化洗液要求新鮮配制,浸泡
30分鐘后,樣本經(jīng)脫水、封固,便可測量。此外,熒光DNA染色法,過程基本與流式
細胞術染色相同,故不詳述。