生物顯微石蠟切片樣品制片的步驟和原理
石蠟制片法(paraffin sectioning ),即用石蠟作為包埋劑,
將植物組織經(jīng)固定、脫水、透明后包埋在石蠟中,然后用切片機(jī)切片,
所以稱作石蠟切片法。
石蠟制片有許多優(yōu)點(diǎn):①易操作。
②可以把材料切成均勻、極�。ǎ�1 一12μm )的切片。
③切下的單個(gè)
蠟片可以連接形成蠟帶,有利于作連續(xù)切片,這是其他制片法難
以達(dá)到的,除一些極小的材料因經(jīng)不住石蠟切片法中所應(yīng)用的各種試
劑處理,而不能用于石蠟切片外,一般的材料都可以用石蠟切片法制
片。④可永久保存。石蠟切片也有缺點(diǎn):制片需要較長的時(shí)間,操作
過程較復(fù)雜;在脫水與浸蠟后,容易使組織收縮、變硬、變脆;堅(jiān)硬、
易脆的材料不適宜用石蠟制片法。
石蠟制片的應(yīng)用:石蠟制片可用于:①研究植物的發(fā)育,如小麥
的小抱子發(fā)育、大飽子發(fā)育、雙受精過程、胚的發(fā)育等②植物器官和
組織的結(jié)構(gòu),如根、莖、葉、子房和胚珠的結(jié)構(gòu)
③組織化學(xué)④RNA 原位雜交。
⑤組織切片原位PCR.一般來說,用冰凍切片法制備的切片做原位
雜交,對所要檢測的DNA 或RNA 的陽性檢測率要高于石蠟切片。這是
因?yàn)楸鶅銮衅苊饬藢M織細(xì)胞的核酸保存不利的處理,而石蠟切片
中對組織細(xì)胞處理往往會破壞核糖核酸。
但是冰凍切片的組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)特性的保存則大大遜色于石蠟切
片。因此在選擇使用何種切片方法時(shí)要權(quán)衡考慮�?上仍囉檬炃衅�
如果待檢測的靶核酸量少,石蠟切片染色弱,則應(yīng)采用冰凍切片。