冰凍切片的操作步驟-昆蟲研究體視圖像顯微鏡
信息分類：生命科學資訊 作者:YIYI發(fā)布
冰凍切片的操作步驟-昆蟲研究體視圖像顯微鏡
1.將冰凍附著器連接在切片機與二氧化碳鋼筒之間，旋開標本臺后的開關，
再將鋼筒口上的開關打開，隨即不停地開、閉標本臺后的開關，檢查氣體噴出的程度。
氣體噴出時，能聽到噓噓聲，同時看到標本臺上有白霜狀的附著物，
這就證明鋼筒貯存物確系液態(tài)二氧化碳。這時可將鋼筒開關緊閉待用。若噴出氣體時，
只能聽到很高如金屬性噪音而又無白霜物出現，這表示貯存的液態(tài)二氧化碳氣體已用
盡，應即重新貯入再用。
2.將標本臺用水濕潤到適宜程度即將組織塊(新鮮的組織快，或固定后經水洗的
組織塊)放在上面。關閉標本臺后的開關并將二氧化碳鋼筒上的開關稍微打開，
隨后再有節(jié)奏地來回開、閉標本臺后的開關，使氣化的二氧化碳不時從標本臺噴出，
使組織塊凍結。
3.在凍結組織塊的同時，標本臺側面的小孔，應對著切片刀，使刀片的溫度亦隨著下
降并調節(jié)切片的厚度(約15-20微米)和轉動標本臺的升降把手，使冰凍組織塊的上端與
·切片刀相接為止。
4.當組織塊表面呈現輕微的溶化時即開始切片。切割后若在刀片上出現白色而脆的
飛散碎片，表示組織塊太硬，若為松軟的粥狀則又凍結不足。為了避免這種缺點，
可將組織塊凍結得稍微過硬，然后用手指按在塊上，待表面輕微溶化，
即可連續(xù)切下幾個適用的切片。
5.切下的切片附著在刀片上，可用濕潤的毛筆將它掃入盛水的培養(yǎng)皿中。
切片應平攤,在水面或沉在水底。如切片卷起，應該用毛筆將它攤平。
6.將貯存切片的培養(yǎng)皿放在黑紙上，選擇好的切片，然后把已涂梅氏蛋
白液的載玻片的一端浸在培養(yǎng)皿水中，用毛筆將切片帶到載玻片上攤平，
將載玻片移出水面，用吸水紙吸干水分(可用手指在切片上稍壓)，并立即滴幾滴
純酒精于切片上。
30秒鐘后吸干酒精，再滴上另外的純酒精，數秒鐘后，繼續(xù)將它吸干。
待酒精尚未干涸時，在切片上立即滴上10%的火棉膠溶液(火棉膠1克，純酒精50毫升，乙醚50毫升)，
并隨手將玻片傾斜，使多余的火棉膠溶液流掉，隨即將載玻片經過83%到70%酒精處理。
至此，在切片上已形成一薄層火棉膠，切片保持在里面不易脫落了。
7.將涂有火棉膠的冰凍切片從酒精移回到水中，然后選用適合于制片目的的各種不同
的染色方法進行染色，隨后依次進行脫水、透明和封藏。
采用明膠一冰凍切片法時，組織塊經固定、沖珠，即浸入10%的明膠溶液(明膠2克
加入10%的苯酚水溶液20毫升).，在37℃溫箱中24小時，使明膠充分透入，再移入25%的
明膠溶掖中(明膠5克加入1%的苯酚水溶液20毫升)，37℃, 12-24小時。然后用一紙盒
傾入新的25%明膠液，把組織塊放入盒內擺好位置，移入冰箱中使其冷卻凝固即完成包埋
過程。已凝固的明膠塊用小刀修整，因明膠防礙冰凍，僅留2一3毫米的膠邊，支持標本
即可。讓修整好的明膠塊在空氣中把水分蒸發(fā)，即投入10%福爾馬林榕液硬化12-24小時。
切片前將明膠塊放入水中洗滌10-30分鐘即可在冰凍切片機上切片，然后貼片、染
色、脫水、透明和封藏。尚須指出，用明膠包埋的切片遇90%以上的酒精時，將引起
收縮。因此，在染色和封藏時，宜采用水溶性染色劑和封藏劑。
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