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內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作步驟簡介-無菌實(shí)驗(yàn)

信息分類：生命科學(xué)資訊　　　　作者:YIYI發(fā)布　

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內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作步驟簡介-無菌實(shí)驗(yàn)

【實(shí)驗(yàn)操作】

取材
(1)取新生1---2d的大鼠1只，采用脫頸椎法將其處死。
(2)用70%的乙醉擦拭大鼠全身3遇。
(3)在無菌條件下，用解剖剪剪開大腿皮膚，剝?nèi)テっ?/div>
(4)用眼科剪取下大腿肌肉，將其置于盛有D-Hanks液的培養(yǎng)皿中。
(5)除去肌肉組織上黏連的脂肪組織，并將肌肉中的骨骼剔除。
(6)將上述肌肉組織用D-Hanks液再反復(fù)清洗3遍，然后置于含用培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。

消化
    (1)用眼科剪將肌肉組織剪成大小為1mm3的小塊，
放人盛有膠原酶液(2000U/ml)的三角燒瓶中，于37℃消化24h左右。

    (2)吸管用力吹打消化后的肌肉組織塊，用無菌的沙網(wǎng)將吹打后
殘余的組織碎塊加以濾過，收集細(xì)胞懸液于lOml離心管中。

    (3) 800r/min離心5min，棄上清。

    (4)加人含10%胎牛血清的培養(yǎng)基，吹打沉淀的細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液。

    (5)將細(xì)胞接種于覆蓋有0.01%明膠的培養(yǎng)皿中，接種量可增大到2X10六次方個(gè)細(xì)胞/皿。
    (6)將培養(yǎng)皿置于37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，4'--5d后即可得到大量的骨骼肌細(xì)胞。
本文由出自上海光學(xué)儀器廠，轉(zhuǎn)載請注明
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