牛結(jié)核病的臨床癥狀以及診斷的方法！動物疾病研究用顯微鏡出售

由于病程很長，所以病癥隨病灶在體內(nèi)的分布會有所不同，在大部分例子里，即便是感染很久且多種臟器被波及還是沒有特征性癥狀。如果肺部被侵犯，主要癥狀可能就是天氣改變及輕壓氣管會引起咳嗽，或是乾咳、呼吸困難及肺炎等。某些感染動物的淋巴結(jié)腫大可能阻塞呼吸道、消化道或是血管，而頭頸淋巴結(jié)腫大比較容易被發(fā)現(xiàn)，甚至可能因外傷而破裂。而消化道被感染則可能引起不定時下痢或是便秘。神經(jīng)癥狀被侵犯時，會出現(xiàn)麻痺、行動障礙等神經(jīng)癥狀。此外雌性生殖系統(tǒng)及乳房易被波及，雄性生殖系統(tǒng)則少見病癥，病原侵犯乳房后于哺乳時可能造成仔畜感染。而經(jīng)由傷口感染則可能形成肉芽腫性潰瘍。

診斷的方法

（1）臨床診斷

<1>延遲過敏反應(yīng)試驗(yàn)法

主要檢測方法為皮內(nèi)結(jié)核菌素試驗(yàn)，牛結(jié)核病檢驗(yàn)以皮內(nèi)結(jié)核菌素檢驗(yàn)為原則，必要時得報請中央主管機(jī)關(guān)同意后，采用皮內(nèi)結(jié)核菌素駢比檢驗(yàn)法（Comparative Intradermal Tuberculin Test）或迦瑪干擾素檢驗(yàn)法 （Interferon-γ Assay System）。操作方法為將結(jié)核菌素（purified protein derivatives, PPD, 3 mg/ml）0.1 ml注射于尾根皺襞腹側(cè)中央部位，必要時報請中央機(jī)關(guān)核準(zhǔn)后采用頸側(cè)部注射，待72 ± 6小時后檢查，任何腫脹都視為陽性反應(yīng)，即判定為感染牛結(jié)核病。注射部位勿以酒精消毒，針頭應(yīng)進(jìn)入皮膚較深層地方而不穿透至皮下組織，正確之注射應(yīng)出現(xiàn)黃豆大之隆起。經(jīng)結(jié)核菌檢驗(yàn)牛只60天內(nèi)不再施以結(jié)核菌素檢驗(yàn)。

<2>肉眼病變

本病通常是慢性衰弱性疾病，但是也有可能產(chǎn)生急性快速之病程。全身都可能被感染，但病灶最常出現(xiàn)于淋巴結(jié)（尤其是頭頸部）、肺臟、腸道、肝臟、脾臟、胸膜及腹膜。剖檢上，于支氣管淋巴結(jié)、縱膈淋巴結(jié)、咽背淋巴結(jié)及門脈淋巴結(jié)最常見到病灶，其他在肺臟、肝臟、脾臟及體腔也可能見到病灶。結(jié)節(jié)性肉芽腫通常為黃色外觀，內(nèi)部呈現(xiàn)乾酪樣或是鈣化，也可能有包覆膿汁。乾酪樣的中心通常是乾燥、堅實(shí)且外覆一層不同程度之纖維結(jié)締組織外膜。病灶大小變化很大，可能小到肉眼不易察覺，或者大到比臟器還大，因此對于器官組織連續(xù)性切片觀察是必要的。

（2）實(shí)驗(yàn)室診斷

<1>直接鏡檢法

將呼吸道分泌物、乳汁及生殖道分泌物等直接做成抹片，以進(jìn)行抗酸性染色后利用顯微鏡鏡檢觀察，分支桿菌會呈現(xiàn)紅色的陽性反應(yīng)，而背景及其他非抗酸菌會被染成藍(lán)色，但是此法需要較高量之細(xì)菌數(shù)才可被檢出。

由M. bovis所造成之病灶常不易發(fā)現(xiàn)病原，因此就算鏡檢下沒有看到抗酸性細(xì)菌也不能排除M. bovis所造成之結(jié)核病。

<2>組織病理檢查

組織病理上，初期滲出型病變區(qū)會有大量滲出液及嗜中性球，而肉芽腫病變區(qū)會有乾酪樣壞死并有鈣化，并以包膜包覆，內(nèi)有巨噬細(xì)胞、類上皮細(xì)胞、藍(lán)罕氏細(xì)胞為主的肉芽腫炎癥反應(yīng)。

<3>其他血液相關(guān)的檢驗(yàn)方法

如迦瑪干擾素檢驗(yàn)法及淋巴球增生法為測量細(xì)胞免疫反應(yīng)，而ELISA則是檢測抗體，ELISA使用限制頗多，目前在某些國家應(yīng)用于檢測野生動物之感染。

<4>細(xì)菌分離鑑定

將疑似感染 TB之動物之臟器淋巴組織，以 0.1 % 之次氯酸鈉溶液清洗后浸置12～24 小時。以電動磨碎機(jī)磨碎，依序加入0.5 N NaOH、6 N HCl、1 N NaOH處理。離心30分鐘后，將沉淀物接種于Lowenstein-Jensen及Middlebrook 7H10培養(yǎng)基分離結(jié)核分支桿菌。于5至14週菌落形成時，以抗酸染色及市售之檢驗(yàn)套組確定是否為結(jié)核分支桿菌。

Lowenstein-Jensen及Middlebrook 7H10為分離結(jié)核菌之特殊培養(yǎng)基，含多種養(yǎng)分及抑雜菌物質(zhì)，若添加甘油可促進(jìn)人及鳥型分支桿菌生長但會抑制牛型分支桿菌生長。

<5>分子生物檢驗(yàn)法

目前針對M. bovis DNA之不同區(qū)域設(shè)計有相當(dāng)多特異性引子，如16S-26S rDNA、IS6110及IS1081、以及特殊蛋白MPB70及38kDa抗原區(qū)域等，可以作為快速輔助診斷的工具。再者菌株純化后，可以基因型分類技術(shù)建立不同M. bovis菌株之不同之基因指紋，如spoligotyping、RFLP及MIRU-VNTR等等，對流行病學(xué)之研究相當(dāng)重要。