酵母菌細(xì)胞數(shù)之定量分析

細(xì)胞數(shù)的定量攸關(guān)整個(gè)酵母菌增生試驗(yàn)的基礎(chǔ)，故一開始考慮采用三種方式進(jìn)行，一為顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，一為酵素免疫分析儀(ELISA reader)測量650 nm吸光值，還有一種方式以分光光度計(jì)估算，酵素免疫分析儀與分光光度計(jì)原理雷同，均是因增生的細(xì)胞產(chǎn)生吸光值，酵素免疫分析儀較快速，一次可以分析96個(gè)樣品，但能分析的樣品量很少約150 mL。為了此試驗(yàn)解酵母菌培養(yǎng)液對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)定量的影響，

以360至800 nm每隔20 nm測其吸光值與含有酵母菌的菌液做一比較，兩者趨勢一致，波長越短吸光值越向上飄移，360至500 nm培養(yǎng)液影響較大，而波長500至800 nm 之培養(yǎng)液本身吸光值較小，均在0.1以下，應(yīng)可作為估算酵母菌細(xì)胞個(gè)數(shù)所選擇的波長，根據(jù)John Wiley 2002是以600 nm為固定波長。John Wiley 2002建議以波長600 nm作為推估酵母菌細(xì)胞個(gè)數(shù)的固定波長，以波長600 nm進(jìn)行以下測試。

在顯微鏡的觀察下，酵母菌細(xì)胞為圓形顆粒，即使?jié)舛鹊�，也因酵母菌以出芽方式生殖，子代與親代尚未完全分離而集結(jié)，濃度低(顆粒計(jì)數(shù)器小方格內(nèi)約10個(gè)左右)時(shí)雖計(jì)算較方便，方格間計(jì)數(shù)變異大，且剛出芽的子代有時(shí)很小，容易忽略，計(jì)數(shù)每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)所發(fā)時(shí)間多，但酵母菌約90分鐘可分裂一次，意即90分鐘后細(xì)胞數(shù)增加一倍，時(shí)間不宜延遲太久。故一次處理樣本數(shù)不多。

以分光光度計(jì)與顯微鏡做比較，有其一致性，而與John Wiley 2002所統(tǒng)計(jì)分析得計(jì)算公式(如下式)相差1 倍。

0.1 OD600=1.8 X 106 cell/mL，故本試驗(yàn)以1 OD600=9 X 106 cell/mL估算細(xì)胞個(gè)數(shù)。