室溫下，將上層澄清液吸出之后，加入1.5 mL之新鮮培養(yǎng)液(SD-His or SD-His-Ura)和1.5 mL含有30% glycerol 培養(yǎng)液(SD-His or SD-His-Ura)，與細胞混合均勻，分裝至1 mL之微量離心管中(100 ul/vial)，并貼上標籤(標示菌種、培養(yǎng)液、保存日期、保存者、編號)。

將離心管置于保存盒內(nèi)，先置放4℃冰箱保存約3小時，在放入-20℃冰箱儲藏約3小時。最后再置于-80℃冰箱儲藏。一般而言，酵母菌可置于含有15% glycerol培養(yǎng)液中，于-80℃下儲藏長達5年。

酵母菌之再活化 (Strain revival)

1.將一包Medium( SD medium-His )，倒入500 mL之廣口瓶中，加入350mL D.D. water，取出14 mL之培養(yǎng)液，加入6 mL即可(可得20 mL 30% glycerol)；其馀之培養(yǎng)液加入144 mL D.D. water，即為SD-medium-His；取SD-medium-His 200 mL加入4 g agarose和0.02g NaOH，即為SDA-medium-His。標示品名、配制者、日期、貼上滅菌帶，滅菌。滅菌前需將蓋子松開。

2.將滅完菌的SDA-medium-His，冷卻至約50 ℃，即可將其倒入培養(yǎng)皿內(nèi)，約六分滿(15-20mL)，待乾后，蓋好蓋子，倒置，儲存于4℃冰箱，即為新的培養(yǎng)皿。

3.欲重新活化酵母菌時，于酵母菌儲藏瓶中，取少量上層解凍之酵母菌液，劃在培養(yǎng)皿上，于30℃下培養(yǎng)3~4天，每隔一個月重劃培養(yǎng)皿一次，將舊的培養(yǎng)皿滅菌后丟棄。

酵母菌細胞之制備

取培養(yǎng)盤上少許細胞，將其溶于3.0 mL SD medium-His培養(yǎng)液中，置于軌道震盪器(orbital shaker)上培養(yǎng)隔夜。

取100μL菌液，加上900μL培養(yǎng)液，以分光光度計波長600 nm (OD600)或顯微鏡測定，估算其細胞個數(shù)。

酵母菌細胞數(shù)之定量分析

1.將滅菌之培養(yǎng)液以分光光度計由波長360 nm至波長800 nm每隔20 nm讀一次吸光值，觀察此培養(yǎng)液在此波長范圍內(nèi)有無特殊之吸光值。

2.將培養(yǎng)PL3之酵母菌液亦以分光光度計由波長360 nm至波長800 nm每隔20 nm讀一次吸光值觀察此培養(yǎng)液在此波長范圍內(nèi)有無特殊之吸光值。

3. 在兩種不同濃度菌液分別測其分光光度(OD600)，與進行顯微鏡觀察。顯微鏡觀察將菌液稀釋至適當濃度范圍內(nèi)(顆粒計數(shù)器方格內(nèi)酵母菌細胞數(shù)100個以內(nèi)，超過100則稀釋后重新計數(shù))，混合均勻，在細胞計數(shù)器凹槽注入約10μL菌液，以顯微鏡接目鏡20倍，接物鏡20倍觀察，凡是酵母菌落在細胞計數(shù)器方格線上一律不予計算，計算細胞計數(shù)器的方格中的細胞數(shù)，每一次以計算6個小方格，取其平均值及標準偏差。并且測其在波長600 nm下吸光值。

酵母菌液細胞個數(shù)與分光光度計吸光值線性動態(tài)范圍

將培養(yǎng)24小時之酵母菌液，連續(xù)稀釋測其吸光值，同時并以顯微鏡計數(shù)。

酵母菌生長曲線

于15 mL離心管中加入3 mL培養(yǎng)液(SD medium-His)，自培養(yǎng)皿上刮取少許酵母菌加入培養(yǎng)液中，混合均勻，置于orbital shaker上培養(yǎng)隔夜。

以絕對酒精配制100 ppb 的雌二醇、乙基雌二醇。

取50 m L絕對酒精、100 ppb雌二醇、100 ppb乙基雌二醇、絕對酒精至100 mL血清瓶中，各三重複。此試驗雌二醇、乙基雌二醇最終濃度為500 ppb。

100 ppb雌二醇、100 ppb乙基雌二醇瓶等待酒精揮發(fā)至乾，各加入10 mL SD medium-His-Ura，而兩份的絕對酒精，等待酒精揮發(fā)至乾，一份加入10 mL SD medium-His-Ura作為空白試驗，另一份加入10 mL SD medium-His作為陽性控制組， 以121 ℃、15分鐘滅菌，待冷卻至室溫。

將前一日培養(yǎng)的酵母菌，取移植至上述10 mL新鮮培養(yǎng)液，三重複。

于培養(yǎng)后，在第3、7、22、30、48、54小時取1 mL進行顯微鏡計數(shù)觀察