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顯微鏡下觀察葉綠體是植物進(jìn)行光合作用的細(xì)胞器

信息分類：生命科學(xué)資訊　　　　作者:YIYI發(fā)布　

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顯微鏡下觀察葉綠體是植物進(jìn)行光合作用的細(xì)胞器


葉綠體的分離制備

    葉綠體是植物進(jìn)行光合作用的細(xì)胞器，富含于葉肉細(xì)胞內(nèi).分離和制備有活性的離體
葉綠體是研究葉綠體結(jié)構(gòu)與功能、光合作用機(jī)理及其遺傳控制的重要技術(shù)條件。根據(jù)分離
所得葉綠體的完整程度，大致可分為被膜破碎的破碎葉綠體和被膜的完整葉綠體兩類。
前者具有光合放氧和光合磷酸化的功能，后者則具有完全的光合作用功能。

    分離和制備葉綠體的方法很多，目前最常用的方法是采用差速離心技術(shù)進(jìn)行分部離心。
一般葉綠體的直徑約為幾個(gè)微米，因此細(xì)胞破碎后.在較低的離心力范田內(nèi)即能分離沉淀出
葉綠體。

    (1)材料的選擇:分離和制備葉綠體最常用的高等植物材料有菠菜、碗豆、玉米、大麥等。
低等植物中的衣藻、小球藻等也是常用的材料。

    (2)葉綠體制備液的組成:用于分離制備葉綠體的溶液系統(tǒng)包括緩沖液.如Tris-HCI
Hepes,Tricine(N-3赴甲基甘氨酸)和磷酸緩沖系統(tǒng)等.滲透劉，如甘露糖醉,tU梨醉、蔗糖
和NaC1等，以及其他一些保護(hù)性物質(zhì)，如EDTA, MgCI:和抗壞血酸等.

    (3)葉綠體的分離程序:下面以制備菠菜葉片葉綠體為例，以簡(jiǎn)要說(shuō)明制備葉綠體的操
作程序。取新鮮菠菜葉片剪成小段.加人6倍量的制備液勻漿，用紗布或尼龍網(wǎng)過(guò)濾，濾液
在500 X g下離心2 min，除去細(xì)胞壁及其他細(xì)胞碎片，上清液在1000---1200  X g下離心
5-10 min即可得到葉綠體沉淀。將其懸浮在提取介質(zhì)中0℃ -4℃下保存。
    注意分離所用的試劑、器皿都需要事先在1℃~  4℃下預(yù)冷，整個(gè)操作也應(yīng)在低溫’F進(jìn)
行，并要求盡量迅速.以免影響葉綠體的完整性和生理活性.

本文由出自上海光學(xué)儀器廠，轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明
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