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顯微鏡鏡檢之Ziehl-Neelsen染色法的抹片染色步驟！

信息分類：生命科學(xué)小百科　　　　作者:YIYI發(fā)布　

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顯微鏡鏡檢之Ziehl-Neelsen染色法的抹片染色步驟！

Ziehl-Neelsen染色法：為正統(tǒng)carbolfuchsin染色，需在玻片下加熱使染色劑溶液透到結(jié)核菌細(xì)胞壁內(nèi)，所以又叫“熱染法”
至少要觀察300個(gè)視野，都不見抗酸菌，才能報(bào)告為陰性反應(yīng)�？顾峋�(xì)胞壁中mycolic acid 和waxes與carbolfuchsin結(jié)合成複合物，即使使用酸性酒精亦不會脫色。
抹片染色步驟如下－

(a) 抹片染色前必須于80℃加熱15分鐘，使之固定。

(b) 覆蓋carbolfuchsin 染色劑(0.3 g basic fuchsin 溶于10 mL 95% ethanol，再加入5 mL phenol和95 mL H2O，使用前，染色劑必須過濾)于抹片上。

(c) 使用酒精燈的火焰于抹片下，緩慢移動加熱一分鐘，可使玻片上的染色液冒出少許蒸氣，但不可沸騰或者乾掉。

(d) 讓染色液停留玻片上5分鐘，不必再加熱。

(e) 使用酸性酒精(97 mL 95% ethanol 加入3 mL HCl)于抹片上脫色3分鐘。

(f) 以水沖洗，傾斜玻片，使滴乾。

(g) 覆蓋甲基藍(lán)染色液(0.3 g methylene blue溶液100 mL H2O)于抹片上一分鐘。

(h) 再以水沖洗、晾乾。

(i) 以顯微鏡油鏡(1000倍)觀察紅色的抗酸菌，背景或其他細(xì)菌是藍(lán)色。

(j) 必要時(shí)，做陽性和陰性對照組染色。

本文由出自上海光學(xué)儀器廠，轉(zhuǎn)載請注明

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