分離細(xì)胞核技術(shù)
將真核細(xì)胞的細(xì)胞核與細(xì)胞其他部分分開, 以利其他實(shí)驗(yàn)之用.

材料：

Lysis buffer

[配方] 10mM Tris.Cl, pH7.43mM CaCl2

2mM MgCl2

Nonidet P-40(NP-40) lysis buffer B

[配方] 10mM Tris.Cl, pH7.43mM CaCl2

2mM MgCl2  1﹪NP-40

   (前三項(xiàng)配合先高溫高壓消毒后, 待冷卻再加入NP-40)

均質(zhì)器

方法：

1. 對(duì)單層組織培養(yǎng)細(xì)胞, 可先到去培養(yǎng)液, 以5ml, 4℃ PBS清洗細(xì)胞二次, 再以高溫高壓消毒過之軟膠刮刀將細(xì)胞刮下, 并離心1,500rpm, 5min, 4℃； 若為浮懸細(xì)胞, 則直接離心1,500rpm, 5min, 4℃, 并以4℃ PBS洗細(xì)胞二次(離心, 倒去上清), 本實(shí)驗(yàn)均以5×107細(xì)胞量設(shè)計(jì).

2. 將細(xì)胞溶于15μl, 4℃, lysis buffer中, 緩緩溷合, 10min.

3. 離心4℃, 1,500rpm, 5min, 倒去上清, 再將細(xì)胞溶于1ml lysis buffer中.

4. 再加入1ml NP-40 lysis buffer B, 緩緩充分溷合.

5. 將細(xì)胞吸入均質(zhì)器, 攪動(dòng)10次, 取少數(shù)液置血液計(jì)數(shù)器, 在顯微鏡下檢視細(xì)胞是否只剩細(xì)胞核.

6. 將只剩細(xì)胞核的細(xì)胞溶轉(zhuǎn)入無菌離心管中, 離心1,500rpm, 4℃, 5min.

7. 仔細(xì)吸除上清, 將沉淀之細(xì)胞核置冰上, 再加入200μl之甘油保存液(配方：50mM Tris.Cl, pH8.3

40﹪ glycerol
5mM MgCl2

0.1mM EDTA),

使細(xì)胞核溶于液中, 在將之保存在-70℃中.