提問:將mRNA做成為cDNA的方法？


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提問：將mRNA做成為cDNA的方法？

1.     準(zhǔn)備2.5mM的dNTPmix與5x Reverse Transcriptase (RT) buffer(含250mM Tris-Cl, pH8.3, 375mM KCl, 15mM MgCl2), RT 200μg/μl, 0.1M DTT(通常隨買RT并附), 10x Taq polymerase buffer.

2.     以PCR用0.5ml離心管, 準(zhǔn)備mRNA, (最好1μg/μl), 10μl, 加入1μl(0.1μg/μl)工random primer(6-mer), 置70℃, 2min.

3.     加入5x RT buffer 5μl,  0.1M DTT 3.5μl,  dNTPmix 5μl,  RT 1μl, 置37℃1hr.

4.     置70℃, 5min, 使RT破壞.

5.     取2.5μl出來用置入另1PCR用0.5ml離心管, 加入8μl dNTPmix, 10μl Taq polymerase buffer, 加入針對(duì)此基因設(shè)計(jì)的2個(gè)primers各1μl, 加入1μl Taq polymerase,  再加入dH2O 77μl,  再加50μl mineral oil,  執(zhí)行PCR, 94℃, 5min, 94℃, 1min, 55℃, 1min, 72℃, 2min, 30cycles, 即成. 所得成品可以電泳純化.




不知道存在的普通對(duì)象的詳細(xì)信息！捕捉圖像之間繼續(xù)使用內(nèi)置的130萬像素分辨率的數(shù)碼相機(jī)。你甚至可以捕捉近距離對(duì)焦視頻！的詳