質(zhì)體轉(zhuǎn)植

將質(zhì)體由一種帶此質(zhì)體的菌種中提純后, 再轉(zhuǎn)植入另一不帶此質(zhì)體的菌種中, 并以此質(zhì)體所帶的可選擇性標(biāo)志來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)植結(jié)果.

實(shí)    驗(yàn)：

材    料：

以提純之含Lac Z＋之質(zhì)體(并含抗生素Amp, Tetracycline或其他抗生素標(biāo)志).

不含此質(zhì)體, 且不能代謝Lactose之菌種.

2X transformation and storage solution(TSS).

[配方] 將40﹪(W/V)之PEG3350以L(fǎng)B稀釋至20﹪(此PEG液及LB液均經(jīng)消毒過(guò)). 且此LB液中含有10mM之MgCl2, 之后加DMSO至10﹪(V/V), 并調(diào)整pH至6.5.

LB液含20mM Glucose

方    法：

1.     將過(guò)夜成長(zhǎng)之無(wú)Plasmid菌液, 以1：5稀釋于LB液中, 使在37℃, 300rpm振盪培養(yǎng)箱中長(zhǎng)1hr.

2.     取15ml上述菌液, 放入一離心管中, 加入等量之2X TSS, 緩緩溷合, 置冰上5min.

3.     離心4,000rpm, 5min倒去上清, 再加入3ml之1X TSS (以2XTSS 加消毒過(guò)之dH2O而成), 使細(xì)菌溶解.

4.     取100μl之細(xì)菌, 加5μl之質(zhì)體DNA(大約1~100μg DNA即可), 充分溷合(在一個(gè)1.5ml的離心管中), 置冰上10min.

5.     加入0.9ml LB液(內(nèi)含20mM glucose), 置37℃, 30min, 每隔3min溷合一次, 在以稀釋涂平盤(pán)法, 將細(xì)菌涂在含IPTG, X-Gal, 及抗生素的平盤(pán)上.

6.     另取為未經(jīng)轉(zhuǎn)植的細(xì)菌(即步驟4時(shí), 100μl菌加5μl之T.E.不含質(zhì)體), 亦稀釋涂平盤(pán)為對(duì)照組.

預(yù)期結(jié)果：大約107CFU/μg DNA結(jié)果可由此方法達(dá)到.