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在顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞應(yīng)注意與壞死細(xì)胞相區(qū)別

信息分類：生命科學(xué)資訊　　　　作者:YIYI發(fā)布　

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在顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞應(yīng)注意與壞死細(xì)胞相區(qū)別

    雜交結(jié)束后，標(biāo)本上結(jié)合的探針有特異結(jié)合的，也有非特異結(jié)合的，甚
至僅僅是物理吸附的，這些探針都會在檢測過程中發(fā)出熒光。因此需要將標(biāo)
本浸入洗脫液中進(jìn)行振蕩洗滌，以除去未結(jié)合的探針和結(jié)合較弱的非特異結(jié)
合的探針。通過調(diào)節(jié)洗脫溫度、洗脫液成分(如甲酰胺濃度、離子強(qiáng)度)來
控制洗脫的嚴(yán)謹(jǐn)度。洗脫溫度越高、甲酰胺濃度越高或者離子強(qiáng)度越低，則
洗脫嚴(yán)謹(jǐn)度越高，得到的信號特異性就越強(qiáng)，背景也就越干凈，但是洗脫強(qiáng)
度過大可能會導(dǎo)致信號丟失。反之，如果洗脫強(qiáng)度越低，則獲得的信號越
多，非特異性信號也會隨之增加，背景升高。如果靶序列在標(biāo)本中含量豐
富，使用直接標(biāo)記探針雜交，就能獲得較強(qiáng)的信號；假若使用的是間接標(biāo)記
探針，用帶有熒光素的一抗(如卵白素一FITC、抗地高辛一FrI℃)與探針
上的半抗原結(jié)合也能獲得理想的熒光信號；如果靶序列含量較少，常常使用
多層免疫結(jié)合的方法來放大信號。

在光鏡下觀察凋亡細(xì)胞應(yīng)注意與壞死細(xì)胞相區(qū)別。雖然壞死細(xì)胞的染色
質(zhì)也有部分凝集和核碎裂的現(xiàn)象，但凝集的不均一性大大低于凋亡細(xì)胞。凋
亡細(xì)胞的胞質(zhì)是濃縮，但壞死細(xì)胞是顯著腫脹，也不形成凋亡小體。組織切
片中的壞死細(xì)胞大量存在，壞死灶周圍伴有炎癥反應(yīng)，而凋亡細(xì)胞往往為單
個或者幾個細(xì)胞散在分布。還應(yīng)將凋亡細(xì)胞的凋亡小體與細(xì)胞中的微核區(qū)別
開。微核(Micronucleus)是由染色體斷裂或斷片從染色體脫落造成的染色體
異�，F(xiàn)象。微核細(xì)胞中除主核以外，還有與主核完全不相連且染色與主核一
致的“小核”。除二者形成的原因不同外，微核位于細(xì)胞內(nèi)，其成分完全是
染色體片斷；而凋亡小體脫落到細(xì)胞外，是由染色質(zhì)片斷、細(xì)胞器和胞質(zhì)成
分由細(xì)胞膜包裹而形成的圓形小體。
本文由出自上海光學(xué)儀器廠，轉(zhuǎn)載請注明
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