利用電刺激可促使細(xì)胞融合-細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
顯微鏡A. 受核卵母細(xì)胞的去核操作
哺乳動(dòng)物的復(fù)制并非僅靠一個(gè)細(xì)胞即可達(dá)成,此一細(xì)胞必須借助卵
母細(xì)胞內(nèi)所含發(fā)軔因子,將基因組再程序化作用后,始具有發(fā)育能
力。然因卵母細(xì)胞內(nèi)原已擁有雙套的染色體,若不加以去除,它與
注入含兩套染色體的體細(xì)胞融合后,將形成四套染色體的異�,F(xiàn)
象。因此,首要步驟是先將卵母細(xì)胞內(nèi)的雙套染色體去除。
B. 細(xì)胞注入卵的顯微操作
利用顯微操作技術(shù),將含有正常兩套染色體的單一細(xì)胞注入卵內(nèi)。
C. 受核卵母細(xì)胞與注入細(xì)胞的細(xì)胞融合
供核細(xì)胞在注入卵膜間隙后,供核與受核細(xì)胞間無(wú)法自發(fā)性發(fā)生如
精卵接觸后的融合現(xiàn)象,而必須藉由外力迫使其融合。
利用電刺激可促使細(xì)胞融合,乃因細(xì)胞經(jīng)電激處理后,細(xì)胞膜表面會(huì)形成約
0.5 納米的小孔,經(jīng)證實(shí),此小孔即為導(dǎo)引兩細(xì)胞發(fā)生融合的媒介。
D. 融合細(xì)胞的激活處理
體細(xì)胞復(fù)制時(shí),雖供核細(xì)胞已融入卵母細(xì)胞內(nèi),但供核細(xì)胞融入
后,并無(wú)法激發(fā)如精卵融合后所產(chǎn)生的激活機(jī)制,因而需要以人為
激活方式,模仿精子激活卵母細(xì)胞。利用電刺激或酒精,增加卵母
細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度,或直接以化學(xué)試劑抑制細(xì)胞靜止因子的活
性,均可激活卵母細(xì)胞