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觀察動(dòng)物細(xì)胞顯微鏡-常用的轉(zhuǎn)染方法簡(jiǎn)介

信息分類：生命科學(xué)資訊　　　　作者:YIYI發(fā)布　

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觀察動(dòng)物細(xì)胞顯微鏡-常用的轉(zhuǎn)染方法簡(jiǎn)介



　　動(dòng)物基因的轉(zhuǎn)移感染（transfection）作用是將動(dòng)物的DNA或RNA（甚至是protein）轉(zhuǎn)送進(jìn)入活體細(xì)胞中。
目前，基因轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究基因轉(zhuǎn)殖（transgene）與表達(dá)之重要工具，轉(zhuǎn)染作用通常分為過渡性轉(zhuǎn)染
（transient transfection）及穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染（stable transfection）兩種類型。
前者是將DNA送入活細(xì)胞內(nèi)，但DNA不會(huì)嵌入細(xì)胞的染色體中，其基因表達(dá)分析一般可在2~3天內(nèi)進(jìn)行。
后者是將DNA傳送入活細(xì)胞，被送入細(xì)胞內(nèi)的DNA不是嵌入染色體DNA，而是成為基因附體（episome）存在于細(xì)胞內(nèi)。
一般而言，環(huán)狀質(zhì)體DNA之過渡性轉(zhuǎn)染效果較佳，而直線狀質(zhì)體DNA則在穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染上效果較佳。



　　目前，基因轉(zhuǎn)染技術(shù)常被應(yīng)用于基因表達(dá)之分析研究上，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞株之選擇及測(cè)試技術(shù)頗為重要，
直接影響基因轉(zhuǎn)殖與表達(dá)研究的成敗。

常用的轉(zhuǎn)染方法有如下幾種：（1）磷酸鈣（calcium phosphate）,（2）DEAE-dextran,（3）脂小體（liposome）,
（4）電穿孔（electroporation）,（5）顯微注射（microinjection）,（6）病毒感染（retrovirus infection）,
（7）基因槍（gene-gun）等。前兩項(xiàng)方法是以化學(xué)物質(zhì)創(chuàng)造一個(gè)化學(xué)反應(yīng)環(huán)境，讓DNA附著到動(dòng)物細(xì)胞之表面，
然后DNA被動(dòng)物細(xì)胞所吞噬。以脂小體為媒介的方式，其主要機(jī)制雖不全然清楚，

但DNA帶負(fù)電之磷酸根會(huì)與脂小體表面之正電荷結(jié)合，脂小體帶正電荷的部分又會(huì)與細(xì)胞表面帶負(fù)電荷的唾液酸
（sialic acid）結(jié)合，藉以進(jìn)行轉(zhuǎn)染。電穿孔則藉電流方式進(jìn)行。

顯微注射是在顯微鏡的幫助下，直接以微細(xì)針管將物質(zhì)穿刺細(xì)胞打入。病毒感染是利用多種不同的病毒特性，
將DNA改造成病毒的一部份，另外病毒本身致癌基因或有害人類健康的基因也加以改造，再藉病毒感染方式送入基因。
基因槍是一種粒子槍法（microprojectile bombardment），欲送入的基因可涂裹在細(xì)微的粒子子彈上，
再被推壓如散彈方式射入目標(biāo)細(xì)胞或組織中。除以上所提七種方式外，在植物基因轉(zhuǎn)殖（transgenic plant）上，
另可利用農(nóng)桿菌媒介（Agrobacterium-mediated）方式，首先把基因接上載體，
再把載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌，藉由農(nóng)桿菌為媒介，把外來基因?qū)胫参锛?xì)胞。
本文由出自上海光學(xué)儀器廠，轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明
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