微生物學(xué)的研究方法 

第一節(jié)　微生物檢視法

第二節(jié)　微生物染色法

第三節(jié)　微生物血清學(xué)檢查

第四節(jié)　微生物分子生物學(xué)檢查

第一節(jié)　微生物檢視法 

顯微鏡的分類及原理

顯微鏡可分為光學(xué)顯微鏡(light microscope)和電子顯微鏡(electron microscope)兩類。光學(xué)顯微鏡是利用鏡片將光線經(jīng)數(shù)次折射而放大物體影像。電子顯微鏡則以電子束取代光線，磁場取代鏡片；如此能增加其解像力，用于觀察更細(xì)微的構(gòu)造。

電子顯微鏡又可分為觀察細(xì)胞內(nèi)部構(gòu)造的穿透式電子顯微鏡，和觀察細(xì)胞表面的掃瞄式電子顯微鏡。

不過電子顯微鏡頗為龐大且昂貴，多用于研究為主。

一般醫(yī)院、檢驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)室的使用，則以光學(xué)顯微鏡為主。

其他尚有利用反折光，適于觀察螺旋體的暗視野顯微鏡(dark-field microscope)；適用于觀察活體細(xì)胞的相位差顯微鏡(phase-contrast microscope)；結(jié)合螢光染劑的螢光顯微鏡(fluorescent microscope)等。

第二節(jié)　微生物染色法 

因?yàn)榇蟛糠值募?xì)菌是微小透明，必須經(jīng)過染色，才能很快的在顯微鏡下觀察到。染色乃先將檢體涂薄薄一層于玻片上制成抹片，加上會(huì)與細(xì)胞特殊成份結(jié)合的化學(xué)染料；有的則再經(jīng)脫色、沖洗與複染等步驟。

分為簡單染色法及鑑別染色法兩類。

簡單染色法

簡單染色法(simple stain)是使用單一染劑來染色。用以觀察細(xì)菌型態(tài)或自然排列情形。

堿性染料(Basic Dye)

酸性染料(Acid Dye)

中性染料(Neutxal Dye)

堿性染料

常用的包括甲基藍(lán)(methylene blue)、結(jié)晶紫(crystal violet)及番紅(safranin)等含陽離子染劑，可與帶陰性電荷的細(xì)菌核酸、細(xì)胞壁等結(jié)合。

酸性染料

常用的包括伊紅(eosin)及剛果紅(corgo red)等含陰離子染劑，通常做為細(xì)胞質(zhì)染色之用。

中性染料

如由甲基藍(lán)與伊紅形成的複合鹽類。

鑑別染色法

鑑別染色法(differential stain)是使用兩種以上的染劑，可用來鑑別特殊的細(xì)菌或構(gòu)造。

革蘭氏染色法

耐酸性染色法

其他染色法

革蘭氏染色法

此為最常用的鑑別染色法。首先以結(jié)晶紫將所有細(xì)菌染色，其次用革蘭氏碘液(Gram's iodine solution)讓結(jié)晶紫與細(xì)胞壁緊密結(jié)合。第三步為使用95%酒精脫色；依細(xì)胞壁成份不同，使得有些細(xì)菌原先染上的初染劑會(huì)脫掉，有些則不會(huì)。最后再以番紅當(dāng)對比染劑，將被脫色的細(xì)菌再染上新的顏色。

依革蘭氏染色法的結(jié)果，可將細(xì)菌分為革蘭氏陽性菌[G(+)]和革蘭氏陰性菌[G(-)]兩大類。G(+)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較低，經(jīng)酒精作用后，菌體的通透性相對降低，結(jié)晶紫不易脫色，因此會(huì)呈現(xiàn)結(jié)晶紫的藍(lán)紫色。而G(-)菌細(xì)胞壁含較高量的脂質(zhì)，當(dāng)這些脂質(zhì)經(jīng)酒精溶解后，菌體的通透性增加，導(dǎo)致結(jié)晶紫被脫色，因此會(huì)呈現(xiàn)番紅染上的紅色（表2-1）。

耐酸性染色法

分枝桿菌(Mycobacterium) 如結(jié)核桿菌、痲瘋桿菌等，因其細(xì)胞壁含大量脂質(zhì)，無法和革蘭氏染劑結(jié)合，需用此特殊法染色觀察。先加熱將洋紅(fuchsin)與細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)緊密結(jié)合，再用含酸的酒精脫色，一般非耐酸菌會(huì)脫色，再經(jīng)甲基藍(lán)複染呈藍(lán)色；而分枝桿菌仍保留洋紅染劑，呈現(xiàn)紅色，因此稱為耐酸性染色法（圖2-1）。

其他染色法

鞭毛染色法、莢膜染色法、芽孢染色法及螢光染色法等，可用于特殊的細(xì)菌種類。Wright-Giemsa染色法則用來染血液中的寄生蟲。

陰性染色法

陰性染色法(negative stain)為使用印度墨汁(India ink)將背景著色，但不染菌體，便于觀察有巨大莢膜的微生物（如隱球菌），以及螺旋體等不易著色的細(xì)菌