了解環(huán)境污染物造成細胞染色體缺失之影響。

(二) 儀器和藥品

1.       離心機,倒立顯微鏡,光學顯微鏡

2.       甲醇,冰醋酸,乙醯胺秋水仙素,氯化鉀,生理食鹽水(PBS),緩衝溶液(Sorensen’s Buffer, SB),吉氏染劑(Giemsa)

(三) 實驗原理

染色體存在于細胞核內(nèi)，電子顯微鏡下觀察，可發(fā)現(xiàn)它是由許多彼此相連的染色顆粒(chromomere)所組成。染色體內(nèi)部的物質(zhì)主要為遺傳物質(zhì)去氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)，其次為一種堿性的核蛋白(histone)，二者組成一種複雜的化合物。細胞分裂時，染色體構(gòu)造之型態(tài)與染色體的分離與，筱關(guān)細胞週期的正常進行，雖染色體增殖時，其形狀大小亦隨染色體構(gòu)造上的異常可能會自然發(fā)生，但亦會由物理及化學因子誘導而產(chǎn)生，包括了缺失（deletion）、重複（duplication）、倒轉(zhuǎn)（inversion）、異位（translocation）。染色體之異常常與許多遺傳疾病及癌癥相關(guān)，因此常用做測試污染毒性物質(zhì)對細胞遺傳毒性之指標。

(四)、實驗流程

1.       種5 x105 cells/60mm Dish,106 cells/100mm Dish 于培養(yǎng)皿18小時

2.       加藥Cadmium (0, 0.5, 1, 2 M )處理24hr后,換新鮮medium收細胞前2小時加入colcemid 0.2 g/ml,使細胞停在分裂中期(metaphase) colcemid: stock 50 g/ml in dil. H2O, dilute with PBS

3.       輕拍培養(yǎng)瓶,搖下細胞,將培養(yǎng)基倒入離心管

4.       以生理食鹽水(PBS)洗一次,再將之倒入離心管

5.       離心800 rpm 4 min 200C

6.       再倒去上清液,輕拍管底以拍散細胞

7.       再以生理食鹽水(PBS)洗培養(yǎng)瓶一次(同步驟5,6,7)

8.       加入5ml 0.5% KCl,靜置6min

9.       離心800 rpm 4 min 200C, 再倒去上清液,輕拍管底以拍散細胞

10.   加入固定液(methanol:acetic acid=3:1,V/V *現(xiàn)配) 離心800 rpm 4 min 20 0C, 再倒去上清液

11.   重複步驟11, 2次,倒乾拍散

12.   再以固定液稀釋細胞,懸浮液至適當濃度

13.   取一滴,滴在載玻片上

14.   風乾后,用3%吉氏染劑(Giemsa)染15分鐘

15.   以蒸餾水去除染劑,風乾觀察