體視顯微鏡做新生大鼠海馬神經元的原代培養(yǎng)疑問？
如何從新生大鼠腦內獲取海馬組織的資料？
解答：
需要多次于體視解剖顯微鏡下練習，處死小鼠，暴露腦組織，分離兩側的海馬組織，白色，豌豆狀，易碎。需小心。最主要是多練習幾次。
原代細胞培養(yǎng)
步驟
(1)、取新生SD大鼠3只，入75%酒精消毒2分鐘，斷頸取腦。
(2)、將新生鼠腦放入盛有冷的D’Hanks平衡鹽溶液的玻璃培養(yǎng)皿內，置冰盤上，于體視解剖顯微鏡下仔細剝除腦膜，分離兩側海馬組織。
(3)、在顯微鏡下將分離的海馬組織放入另一個盛有冷的D’Hanks溶液的玻璃培養(yǎng)皿內，用眼科剪剪成小碎片，并移入15ml離心管中，組織沉底后吸除D’Hanks溶液。
(4)、向離心管中加入37℃ 0.25%胰酶溶液，每6個海馬組織加1ml胰酶消化液，放入37℃培養(yǎng)箱中孵育10-15min，每3分鐘翻轉幾下，至組織塊間拉絲成團即可。900rpm離心2min。
(5)、吸除胰酶消化液，加入等量的37℃種植液以終止消化，置室溫10min。
、加入2ml種植液，以拋光的滴管吹打約15次，分散細胞，靜置10min（如仍有組織塊，應用200目篩網過濾）。
(7)、調整細胞密度，以90-320/mm2的密度種于六孔板內。置37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
、24h后全部吸除種植液，更換成Neurobasal + 2% B27培養(yǎng)液培養(yǎng)。此后每周以此液半量換液2次。培養(yǎng)8-10天進行下一步實驗。

另外，如果你從來沒做過取海馬的工作，建議你先在成年SD大鼠上練習，新生鼠海馬又薄又小，還很嫩，稍不小心就碎掉了，如果你連它具體位置都不清楚，很容易失敗。