細胞培養(yǎng)常識介紹-體細胞觀察專用倒置
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共培養(yǎng)
共培養(yǎng)是指在培養(yǎng)液中加人體細胞共同參與培養(yǎng)胚胎。已應(yīng)用于IVF臨床的幾種主要細
胞是小牛子宮成纖維細胞、輸卵管上皮細胞和Vero細胞(從綠猴的腎臟中分離)。
Wiemer等在培養(yǎng)液中應(yīng)用單層小牛子宮成纖維細胞后顯示胚胎發(fā)育較好并使妊娠率增
加兩倍。這種方法雖然具有很多優(yōu)點,但需要嚴格檢測小牛子宮成纖維細胞中有無各種潛在
的病毒感染。
輸卵管上皮細胞在胚胎體外共培養(yǎng)中可刺激胚胎發(fā)育。Bongso等比較了受精卵在單一培
養(yǎng)液中培養(yǎng)和在共培養(yǎng)液(培養(yǎng)液加入人輸卵管傘端細胞)中培養(yǎng),其受精率在后者中較高
(67%比85%; P<0.01),同時亦可提高胚胎的質(zhì)量。與單純T6與15%血清培養(yǎng)液相比,共
培養(yǎng)可增加分裂至囊胚期的百分率(69%與33%)但不增加已孵化的囊胚期胚胎的百分比。
應(yīng)用此方法亦受兩方面的局限,首先要檢測捐獻輸卵管者有無病毒感染,乙型肝炎等,其
次,輸卵管傘端細胞經(jīng)過4一5代培養(yǎng)后將纖維化,因此需要連續(xù)不斷的輸卵管來源以保證
新的細胞株,這在一些IVF中心并不現(xiàn)實。
由于Vem細胞(從綠猴的腎臟提取)和生殖道有共同的胚胎來源已應(yīng)用于胚胎的共培
養(yǎng),并可增進胚胎發(fā)育。Vem細胞容易培養(yǎng)、分代和冷凍。而且很容易檢測病毒感染。
共培養(yǎng)的一個問題是應(yīng)用哪一種培養(yǎng)液,因為共培養(yǎng)面臨兩種不同的細胞類型。如果培
養(yǎng)液滿足于體細胞的需要,則胚胎可能會被某些核酸和氨基酸傷害。如果培養(yǎng)液滿足于胚胎
的需要,則可能因成分太簡單不能維持體細胞的活性,在短時間內(nèi)引起細胞壞死,繼而影響
胚胎發(fā)育。因此,體細胞先在一種完全含有血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)直到融合,然后置于對胚胎
無傷害而又可支持體細胞發(fā)育數(shù)天的簡單培養(yǎng)液中。