細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)運(yùn)輸系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)步驟之哺乳動(dòng)物細(xì)胞的繼代培養(yǎng)！

（一）哺乳動(dòng)物細(xì)胞的繼代培養(yǎng)

1. 以攝氏37度水浴預(yù)熱培養(yǎng)液（含有10 % 胎牛血清之 DMEM培養(yǎng)液 ）及 Trypsin （胰蛋白酶）溶液。

2.       以無(wú)菌操作方式倒掉舊的培養(yǎng)液，加入1 × PBS溶液（磷酸緩衝液；細(xì)胞等張溶液）5 ml，清洗細(xì)胞表面。

3.       倒掉清洗液，加入 Trypsin 溶液，靜置3分鐘，使細(xì)胞脫離培養(yǎng)皿表面。

4. 加入含有胎牛血清之培養(yǎng)液5 ml以終止Trypsin的作用后，置入離心機(jī)，離心轉(zhuǎn)速為每分鐘1500轉(zhuǎn)，共2分鐘。

5.       倒掉培養(yǎng)液，加入新鮮的培養(yǎng)液，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目后取約2 × 105 個(gè)細(xì)胞至直徑為10 mm的培養(yǎng)皿。補(bǔ)充培養(yǎng)液體積至10 ml后，在培養(yǎng)皿上寫上細(xì)胞名稱、繼代數(shù)目、日期、細(xì)胞數(shù)目，將細(xì)胞放入二氧化碳培養(yǎng)箱。