革蘭氏鑒別染色法將細菌分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌!
革蘭氏染色法(Gram Stain)
一、 目的
利用革蘭氏鑒別染色法將細菌分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。
二、 原理
革蘭氏染色的原理,需要四種試劑加至抹片上,第一種試劑以結晶紫
(crystal violet)做初染(primary stain),初染的功能是使所有細菌染上顏色。第二種
試劑使用媒染劑(mordant),利用革蘭氏碘溶液(Gram's iodine solution)與結晶紫作用
形成不可溶複合物(complex),以加強染劑染色的能力。第三種試劑是以95%酒精
(95% alcohol)做為脫色劑(decolorizing agent),因細胞壁結構和成分組成不同,使得
有些初染劑可被脫掉,有些則不可以被脫掉。第四種試劑以番紅(safranin)做為對照染
劑(counter stain),和初染劑呈對比的顏色,當脫色后,若對照染劑不被細菌所吸收,
則仍維持初染劑的顏色,若對照染劑會被細菌所吸收,則呈現對照染劑的顏色。以此方
法可將細菌作分類。
三、 實驗材料
1. 細菌的培養(yǎng):以nutrient agar plate(或broth)培養(yǎng)Escherichia coli,
Staphylococcus aureus等24小時內的新鮮培養(yǎng)菌。
2. 試劑:crystal violet,Gram's iodine,95% alcohol和safranin O
(或carbolfuchsin),Cedarwood oil,xylene。