顯微鏡百科 -用分光光度計估計菌液濃度時,如何確定?

用分光光度計估計菌液濃度時,如何確定?
信息分類:技術應用 日期: 2011-7-16 10:11:56
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用分光光度計估計菌液濃度時,如何確定?
挑選出一個最適合的波長來測定樣品的混濁度。透光度和吸光值實際上所表達的是一個意思,
就象給你一碗飯,問你吃了多少和剩了多少一樣。
因為你現(xiàn)在不知道需要在什么波長下測定,所以需要找出一個對你樣品最靈敏的波長。
最好的方法是找到有關文獻,這樣將來也有憑據。找不到只能自己找。比如說將你的樣品放入儀器中,
先選一個波長測一下,如果你用透光率作為指標,則數(shù)值越小說明該樣品對該波長越靈敏,
用吸收值則相反。用不同的波長測定,直到找出最靈敏的波長作為實際測定的條件。
如果你的分光光度計夠高級,就可以自動掃描該樣品的吸收圖譜,這樣就不用自己手動一個一個測了。
還要注意,找到最佳波長后,如果你的樣品的吸收值不在0.3~0.8之間的話,說明樣品濃度不合適,需要稀釋或濃縮。手動尋找波長時,每換一個波長都要等待機器穩(wěn)定15min,所以是很費時間的。
但愿你能找到文獻或有高級儀器。
細菌生長情況通常用分光光度計來檢測,但很難給出確定的細胞數(shù)和OD值的對應關系來,細菌密度受很多因素影響,如菌株種類,搖速等。不同菌株在特定的波長處顯現(xiàn)出不同的吸收值(如600或436nm)。
大腸桿菌培養(yǎng)物 一般使用OD600的吸收值.
檢測OD值時,應使OD值在0.05到0.3 之間,如果數(shù)值超過0.3,則應該稀釋樣品。
下面的數(shù)值可作為粗略的估計:
大腸桿菌培養(yǎng)物 1 x 109 cells/ml, 1:4稀釋,OD600值使用Beckman DU-7400檢測時為0.25,使用Beckman DU-40檢測時為0.125 。

