共聚焦顯微鏡冰凍標(biāo)本制作技巧
首先是用特異性的抗體標(biāo)記血管、細(xì)胞和神經(jīng)，最好是用三種 不同的熒光標(biāo)記的抗體；觀察時(shí)我想要用軟件三維重建來(lái)處理，因?yàn)楣簿劢?a href="http://m.xinmaotiandiyuan.com" title="顯微鏡價(jià)格" target="_blank" class="sitelink">顯微鏡獲得的圖像是很薄的，應(yīng)該不能恰巧同時(shí)看到這許多結(jié)構(gòu)。
標(biāo)本似乎沒(méi)有特別的要求，冰凍切片應(yīng)該是個(gè)好選擇，有一點(diǎn)，共聚焦顯微鏡只能觀察大約50um厚的距離，再深處的結(jié)構(gòu)由于組織對(duì)激光和熒光的阻擋而衰減，就看不到了，所以，想要觀察的結(jié)構(gòu)不能太深，這也與選擇的熒光有關(guān)系，長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光(紅色）的更利于觀察深處的結(jié)構(gòu)。 
用confocal觀察的冰凍切片一般是封片在玻片上置于正置顯微鏡下采集圖像，要求厚一些主要是怕封片的時(shí)候漂片，沒(méi)辦法掃到完整的平面。
一般標(biāo)記血管可用cd31,cd34,vWF,等,原組織可用DAPI類染核.用緩沖甘油封片. 
但是一般也不超過(guò)20um（我們的實(shí)驗(yàn)體會(huì)）。
用10um的冰凍切片進(jìn)行貼片，然后熒光雙染，最后在confocal是可以觀察的。我們的腦片大部分都是這個(gè)厚度，效果不錯(cuò)。
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