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利用顯微鏡進(jìn)行懸浮培養(yǎng)細(xì)胞存活率的測定

信息分類：生命科學(xué)資訊　　　　作者:MISS-SHENG發(fā)布　

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利用顯微鏡進(jìn)行懸浮培養(yǎng)細(xì)胞存活率的測定

       由于存活的細(xì)胞膜它是具有一定的選擇透過其它物質(zhì)的特性的，正
常的存活狀態(tài)下它是可以允許水分子或其他小分子的物質(zhì)穿過細(xì)胞膜
進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的，而除這些物質(zhì)以外的物質(zhì)是不能通過的。所以通過這
個(gè)原理利用臺盼藍(lán)或伊文斯藍(lán)這些大分子染料進(jìn)行細(xì)胞的染色，再通
過顯微鏡來觀察這些大分子染料是否進(jìn)入細(xì)胞的體內(nèi)，從而達(dá)到觀看
其著色情況來判定細(xì)胞是否存活。

       以下是進(jìn)行顯微鏡測定懸浮培養(yǎng)細(xì)胞存活率的實(shí)驗(yàn)步驟：

      （1）配備好實(shí)驗(yàn)材料（實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的懸浮細(xì)胞）、儀器設(shè)備（光學(xué)顯
微鏡、加樣器、離心機(jī)、玻片等）、試劑（染料）   

      （2）進(jìn)行染色 將培養(yǎng)過一段時(shí)間的懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，在真空狀態(tài)下用
墊了兩層濾紙的布氏漏斗進(jìn)行懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的抽濾后，放入含量為0.25%
的伊文斯藍(lán)或臺盼藍(lán)的溶液離心管中的，進(jìn)行染色5min,如1000g離心3
秒后，再用新鮮的培養(yǎng)懸浮進(jìn)行離心3-5次，直到達(dá)到液體無色為止。
操作過程中一定要注意細(xì)胞不能處于干燥狀態(tài)。

      （3）鏡檢  將上面以染色的細(xì)胞懸浮于新鮮的培養(yǎng)液中，在光學(xué)顯微
鏡下進(jìn)行觀察細(xì)胞的染色情況，并做好相應(yīng)的記錄，應(yīng)觀察三個(gè)以上范
圍內(nèi)的細(xì)胞，進(jìn)行記錄。

      （4）進(jìn)行結(jié)果計(jì)算  依據(jù)上述記錄的細(xì)胞染色情況計(jì)算出細(xì)胞的存活率。

本文由出自上海光學(xué)儀器廠，轉(zhuǎn)載請注明
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