電子顯微鏡檢術(shù)的標(biāo)本制備
因?yàn)殡娮觾H在高度真空中運(yùn)行時,才形成連續(xù)的電子微束,至少在現(xiàn)代常規(guī)
的電鏡中,尚不可能把活細(xì)胞用于電鏡柱內(nèi)。因此,只能用電鏡檢查巳死而脫水
的材料。由于電鏡的巨大分辨力,在很大程度上彌補(bǔ)了保存生活狀態(tài)組織的老大
難問題。使用電鏡觀察時,
在
光學(xué)顯微鏡檢術(shù)中認(rèn)為是合適的大多數(shù)固定劑,都可產(chǎn)生在電鏡下觀察時
過分大的蛋白質(zhì)性沉淀。傳統(tǒng)的固定劑中,能有效地適用于電子顯微鏡檢術(shù)的,
只有福爾馬林、四氧化鑲和鈕一重銘酸鹽混合物,其中還增加有丙烯醛和谷朧徑
乙醛�,F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)使用其中任何一種致死劑時,重要的是用加人緩沖液的方法,使
固定劑的pH值保持在7.2-7.8 之間。
使用最廣的固定劑是1%或2%的四氧化鋨緩沖液,其作用不僅能保存組織,而
且可對許多組織成分染色。電鏡的“染色”,并不包括與有色染料的結(jié)合,因?yàn)?/div>
使用電子光學(xué)系統(tǒng),不能記錄顏色。
因?yàn)槌R?guī)電鏡電子微束的穿透力非常小,所以組織切片必須非常薄,與光學(xué)
顯微鏡的5-10微米相比,應(yīng)為50-100毫微米。電子顯微鏡檢術(shù)標(biāo)本制備最棘手的
工作,和影響成功的最常見故障,在于要切成這樣極薄的切片,而不使其皺縮、
破裂和發(fā)生其它變形。這個工作可在使用玻璃刀或鉆石刀的超薄切片機(jī)上完成。
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