利用顯微熒光光度計測定細(xì)胞內(nèi)染料標(biāo)記
顯微熒光光度術(shù)(microfluorometry)是利用顯微熒光光度計(microfluorometcr)
對細(xì)胞內(nèi)原有能發(fā)熒光的物質(zhì)或經(jīng)熒光染料標(biāo)記的物質(zhì)進(jìn)行定性、定位和定量的測定
故此法亦稱細(xì)胞熒光光度術(shù)(cytofluorometry),它靈敏度高,比檢測吸收光的敏感度
高2-4個數(shù)量級。
顯微熒光光度計配有高分辨率的
熒光顯微鏡、透射和落射照明系統(tǒng)、
測量光柵、
光電倍增管及其高壓控制裝置、連續(xù)干涉濾片、單色儀以及它電子控制系統(tǒng)等。
測量時先用透射照明系統(tǒng).低光強(qiáng)照明尋找被測熒光樣品.確定測量光柵的測量
范。然后用落射照明系統(tǒng)激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)或熒光標(biāo)記物,由光電倍增管接收
從樣品發(fā)出的熒光并轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?再由控制系統(tǒng)將電信號變成數(shù)字信號后在熒光屏
上顯示.從而得知熒光強(qiáng)度的相對值,
顯微鏡下可以見到適當(dāng)放大的熒光圖像。